Audu struktūru noteikšana, antivielas, un patogēni ar imūnmarķēšanu ir populārs, mūsdienīgs un precīzs. Imūnfluorescence attiecas uz imūnmarķēšanu ar sagatavotu fluorescējošu antivielas kas tiek spīdēti UV gaismā. Tiešā imūnfluorescences noteikšanā testa substrātu pārbauda tieši ar luminiscējošu antivielas, bez sākotnējām antivielām vai mākslīgiem antigēniem.
Kas ir imūnfluorescences tiešā noteikšana?
Audzēja specifiskos antigēnus audzēja audos var noteikt tieši ar imūnfluorescenci. Tādējādi ir iespējams uzzināt, kur ķermenī esošais metastāzes nāca no. Imūnfluorescences tiešā noteikšana ir diagnostikas metode, kuras pamatā ir imunoloģijas, imūnkrāsošanas un imūnhistoķīmijas atklājumi. Šeit galvenā uzmanība tiek pievērsta antivielu spējai saistīties ar noteiktām audu vietām vai antigēniem serumā. Šīs vietas ir epitopi. Bioķīmiskajā diagnostikā ir mākslīgas antivielas vai imitatori (vienskaitlī: mimetiski), kas ļauj marķēt šīs antivielu-antigēnu saites ar fluorescenci vai radioaktivitāti. Mākslīgo antivielu konjugāti faktiski saistās ar epitopiem, no vienas puses, un, no otras puses, tiem ir fluorescējošs marķieris imūnfluorescences gadījumā. Šī ir alternatīva radioaktīvo marķieru izmantošanai. Imūnfluorescences tiešās noteikšanas īpatnība salīdzinājumā ar netiešo noteikšanu ir tāda, ka antiviela, kas saistās ar antigēna epitopu pārbaudāmajā materiālā, vienlaikus jau ir antivielu konjugāts ar fluorescējošo marķieri. Tiešai noteikšanai nav nepieciešamas papildu antivielas interpozīcijai. Imūnfluorescences gadījumā fluoresceīns, kas spīd UV gaismā, un kā fluoresceīna izotiocianātu (FITC) izmanto krāsvielas mākslīgo antivielu konjugātu konstruēšanai. Ciktāl tas lasāms mazliet sarežģīti, bet imūnfluorescences tieša noteikšana ir standarta medicīniskā metode laboratorijas diagnostika par dažādiem medicīniskiem jautājumiem. Antivielas, kas satur fluorescējošu krāsu, ir pieejamas pārdošanai.
Funkcija, efekts un mērķi
Lai veiktu audu specifisko struktūru krāsošanu, audu pētījumiem ir pieejami tiešie imūnfluorescences detektori. Bet tie pastāv arī atsevišķām šūnām. Tieši tur liela nozīme ir plūsmas citometrijai. Un, visbeidzot, ir imūnanalīzes, kas sastāv no cietas un šķidras fāzes. Audumu imunofluorescences pētījumi galvenokārt ir svarīgi onkoloģijā, ti, medikamentu ārstēšanā vēzis. Audzēja specifiskos antigēnus audzēja audos var noteikt tieši ar imūnfluorescenci. Šie audu paraugu izmeklējumi no audzējiem bieži ir svarīgi, lai uzzinātu, kurā ķermeņa vietā atrodas esošais metastāzes vai arī lai izveidotu spriedumu par to, vai audzējs ir labdabīgs vai ļaundabīgs. Atsevišķu šūnu pārbaude ar tiešu imūnfluorescences noteikšanu tiek izmantota, lai atrastu vīrusu antigēnus, baktēriju antigēnus un citus epitopus. Piemēram, cilvēks uzzina, vai šūnas ir inficētas ar vīrusu un kādā infekcijas cikla stadijā šūnas ir. FACS (= ar fluorescenci aktivēta šūnu šķirošana) ir ļoti efektīva plūsmas citometrijas metode, kurā fluorescējoši iezīmētas šūnas tiek sadalītas dažādās testa mēģenēs atkarībā no krāsošanas veida. Šī metode ir svarīga imunoloģijā, Hematoloģija un infektoloģija. Imūnfluorescences imūnās pārbaudes ļauj tieši noteikt vides toksīnus, ģenētiski modificētus organismus un noteiktas pārtikas piedevas. Šajā eksperimentālajā uzstādījumā vienmēr ir cieta un šķidra fāze. Daudzi patogēni, Ieskaitot AIDSizraisot HI vīrusu, var noteikt arī tieši. Tomēr, nosakot infekcijas un autoimūnas slimības, mērķis bieži ir atklāt antivielas, nevis antigēnus. Tā ir aizsardzība molekulas ko ražo paša ķermeņa imūnā sistēma. Šādas noteikšanas tad nav tiešas noteikšanas saskaņā ar šeit sniegto definīciju, jo fluorescējošās antivielas nesavienojas tieši ar paša ķermeņa antigēniem, bet gan ar testa komplekta antigēniem. Šie eksperimentālās asamblejas antigēni savukārt ir saistīti ar endogēnām antivielām. Tikai īpašos noteikšanas un apstiprināšanas testos tiešas imūnfluorescences noteikšanas metodes izmanto bieži sastopamām infekcijām, piemēram, ar HI vīrusi un Hlamīdija. Ir testi daudzām citām slimībām. Vairumā gadījumu antivielu netieša noteikšana ir labāka infekcijas slimības jo ķermeņa imūnā sistēma piemīt ģeniāla spēja atcerēties iepriekšējās infekcijas. Citās situācijās antigēnu tieša noteikšana un antivielu netieša noteikšana papildina viens otru. Pēdējie parāda, ka infekcija ir notikusi jau iepriekš, bet pirmā sniedz precīzāku informāciju par patogenu aktivitātes pašreizējo stāvokli.
Riski, blakusparādības un bīstamība
Ar imūnfluorescences tiešu noteikšanu, tāpat kā visu medicīnisko noteikšanu, ir divi riski: kļūdaini pozitīvu rezultātu un kļūdaini negatīvu rezultātu risks. Viltus pozitīvi rezultāti pacientam rada psiholoģisku diskomfortu un ļoti lielas ciešanas. Tādēļ pozitīviem rezultātiem tiek pievienotas papildu pārbaudes procedūras, īpaši, ja diagnoze noved pie krasām dzīves izmaiņām. Nepatiesi negatīva rezultāta bīstamība ir tāda, ka pacients savlaicīgi neuzzina par draudiem savējiem veselība un varbūt pat sabiedrības veselībai. Tāpēc ir labi veikt daudz pētījumu un veikt pārdošanai gatavu lielu skaitu dažādu imūnfluorescējošo tiešo noteikšanu un tos piedāvāt. Kopā ar citām tiešām un netiešām slimību un patoloģiju noteikšanas metodēm tas palielina diagnozes precizitāti. Tiešās noteikšanas pamatā ir antivielu konjugāts, kas, no vienas puses, saistās ar antigēnu epitopiem, un, no otras puses, vienlaikus izraisa arī fluorescenci. Tādēļ šāds produkts tiek izmantots tikai viena veida testa procedūrās un netiek izmantots cita veida testiem. Šī ir svarīga procesuāla atšķirība no netiešās noteikšanas, kurā primārās antivielas tiek izmantotas augšpus fluorescējošām antivielām, lai saistītos ar epitopu. Tādējādi antivielu konjugāts ir piemērots dažādiem testiem. Šī procesuālā atšķirība atšķiras no medicīniskās atšķirības starp antivielu netiešu noteikšanu un antigēnu tiešu noteikšanu.
