Klīniski atsevišķi, ti, pamatojoties uz sifilisu simptomus, diagnozi nevar noteikt, jo sifilisa simptomi var ievērojami atšķirties un nav specifiski. Tāpēc mikroskopisks un seroloģisks sifilisu jāveic tests. Baktēriju T. pallidum kultivēt barotnē nav iespējams. Mikroskopiskajā diagnostikā sifilisu testa laikā no ādas tiek ņemts uztriepes un mainās gļotādas, un iegūto sekrēciju pārbauda tumšā lauka mikroskopā. Parastā gaismas mikroskopā baktērijas nevar noteikt, jo tie ir pārāk plāni. Papildus tipiskajai struktūrai mazs diametrs, vienmērīgi ruļļi, strauja locīšana un strečings raksturīga kustība baktēriju ķermeņa vidū. Pozitīvs testa rezultāts ir slimības pierādījums, bet negatīvs rezultāts neizslēdz sifilisu. Seroloģiskajā diagnostikā tiek veikti antivielu skrīninga testi, kas ir pozitīvi 2-4 nedēļas pēc inficēšanās. Antivielas tiek atklāti, kas izveidojušies pret antigēniem uz patogēnas virsmas baktērijas. TPHA tests (T. pallidum hemaglutinācijas tests, ko šodien sauc arī par TPPA testu) ir jutīga un ļoti specifiska meklēšanas reakcija, kurā antivielas pret T. pallidum puduri (aglutinātu) sarkanu asinis šūnas (eritrocīti), kas iekrauts ar T. pallidum antigēnu. Tas kļūst pozitīvs 2. nedēļā pēc inficēšanās ar sifilisu un paliek tāds daudzus gadus pēc slimības izārstēšanas (“seronārs”). Agrīnā primārajā posmā tas joprojām var būt negatīvs. Testu izmanto aizdomu par sifilisu gadījumos, bet arī ikdienas skrīningam grūtniecības sākumā, No asinis donori un asins konservi. Pozitīviem rezultātiem nepieciešams apstiprinājuma tests: FTA-ABS testā (antivielu absorbcijas tests ar fluorescences Treponema antivielām) baktērijas ir piestiprināti uz slaida un savesti kopā ar asinis serums, asins šķidrā daļa. The antivielas asins serumā pēc tam pievienojas baktēriju antigēniem. Pēc seruma skalošanas antivielas atkal tiek marķētas ar citām antivielām, kas satur fluorescējošu krāsu. Fluorescences mikroskopā tādējādi kļūst redzamas pret baktērijām meklētās antivielas. FTA-ABS tests, tāpat kā TPPH tests, ir pozitīvs 2. nedēļā pēc inficēšanās un paliek pozitīvs serona rētas nozīmē gadus pēc klīniskās dziedināšanas. Terapijai un progresam tiek izmantots VDRL tests (venerisko slimību laboratorijas tests), kas pazīstams arī kā kardiolipīna flokulācijas tests. uzraudzība. Šo sifilisa testu izmanto lipīdiem specifisku antivielu noteikšanai, kuras atkāpjas, sadzīstot ādas izpausmēm. Kardiolipīns ir antigēns, kas iegūts no sirds liellopu un ar tiem saistīts holesterīns daļiņas. Ielādētās daļiņas tiek apvienotas ar pacienta serumu. Pozitīvā gadījumā notiek flokulācija (aglutinācija). Šis tests kļūst pozitīvs 4-6 nedēļas pēc inficēšanās vai 1-3 nedēļas pēc primārā efekta parādīšanās. Lipīdiem specifisko antivielu daudzums strauji samazinās, kad sifilisa ārējie simptomi dziedē un pēc veiksmīgas ārstēšanas vairs nav sastopami. Šo daudzumu (titru) var izmantot, lai novērtētu, vai terapija bija veiksmīga, vai sifiliss tika nepietiekami ārstēts. Tomēr VDRL tests var būt pozitīvs arī citām slimībām, tāpēc tas ir raksturīgs sifilisam, bet nav raksturīgs tam. CSF tests tiek veikts, lai apstiprinātu neirosifiliju pacientiem ar sifilisa neiroloģiskiem simptomiem un lai atklātu vai izslēgtu asimptomātisku neirozifilu. Neirosifiliju pierāda tikai antivielas CSF, kas arī ražotas CNS, bet ne antivielas, kas migrējušas no seruma uz CSF. To var noteikt, salīdzinot antivielu titrus CSF un serumā. Ja CSF titra un seruma titra attiecība pārsniedz 2, ir aizdomas par neirosifilu. Sifiliss var izpausties dažādos veidos, īpaši ādas simptomi var būt ļoti atšķirīgs: “Sifiliss ir pērtiķis starp ādas slimībām”, ti, tas var viltot gandrīz jebkuru ādas slimību. Dažreiz Roseola syphilitica tiek sajaukta ar zāļu eksantēma, kas ir rezultāts zāļu nepanesamība. Sāpīgais čūla molle, ko izraisa baktērija H. ducreyi, un citi ādas izmaiņas ko izraisa infekcijas (piemēram, granuloma venerum) jānošķir no čūla ciets.
